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對玻片進行染色是細胞學檢查中很重要的一步,如果染色不成功,會導致標本模糊,無法進行觀察。近幾年,細胞學作為一種診斷技術在醫(yī)學領域越來越常見,許多醫(yī)師幾乎每天都要對血涂片或皮膚病灶或內臟采集的細胞學樣本做染色。在玻片染色前要遵守的第一條規(guī)則就是不要讓未染色的玻片與福爾馬林蒸汽接觸,福爾馬林氣體會使染料無法滲透進入細胞,導致顏色模糊,外觀褪色(圖1)。
羅曼諾夫斯基染色(瑞氏,吉姆薩)
大多數醫(yī)師都選擇快速羅曼諾夫斯基染料,這是一種最初由亞甲藍和伊紅配制成的多色染劑。染色步驟包括首先蘸取酒精固定劑(甲醇)以及連續(xù)浸潤于兩種染劑中,先是天青B(N,N,N,-三甲胺),這種基礎染料是亞甲藍的代謝產物;然后是伊紅Y(四溴熒光素),一種酸性染料。
這種染色方法要求玻片自然風干,然后再蘸取酒精固定液。羅曼諾夫斯基染色法本是用于血液和骨髓抹片染色的,但是隨著時間推移和細胞學普及,這種方法有了更廣的應用,可以對任何細胞學樣本染色。
初學者要注意,使用這種染色法時玻片上必須是薄薄的單層細胞樣本,如果樣本太厚則染劑無法正確進入細胞內。
這種染色技術簡單快捷:玻片必須風干和浸入上述三種溶液中。沒有規(guī)定每次需要多少滴染劑或浸潤多久,具體取決于染劑的使用情況以及它們過濾或更換的頻率。一般來說,每種染劑多少滴取決于固定劑和染料需要多長時間才能浸潤細胞。每種染劑3-4滴保持1-2s一般即可成功染色。隨著時間推移,操作技術會逐漸變得爐火純青。
當透明的醋酸膠帶一定要染色時羅曼諾夫斯基染色也是很有用的。有些膠帶質量差所以進入固定液時會卷曲或模糊。單獨用第二種染劑(藍色)或其他染劑比如乳酚藍或結晶紫有可能獲得較好的染色效果。只要在膠帶粘有細胞的底面滴幾滴染料就足夠沉淀。在顯微鏡觀察涂片之前,要用吸水紙吸走多余的染料,否則難以看清細胞細節(jié)。
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