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免疫組化常見脫片原因及解決

來源:http://m.orqossz.cn/    日期:2018-11-29    瀏覽量:載入中...

免疫組化,其實(shí)方法和操作都不是很難,關(guān)鍵是結(jié)果出現(xiàn)異常時(shí)如容易出現(xiàn)組織脫片該如何去解決?我們先了解一下組織脫片的原因有哪些?
1.空白片少,經(jīng)不起反復(fù)折騰;
2.回顧性研究中不可能使用新鮮的切片組織;
3.某些單位先前并沒有使用防脫載玻片保留組織標(biāo)本等。
針對(duì)這些問題,可以嘗試如下改良方法。

針對(duì)這些問題,可以嘗試如下改良方法。
如上所說,先采用酶修復(fù),后熱修復(fù),一般熱修復(fù)是直接置于相應(yīng)的修復(fù)液中煮沸,期間還有可能使用高壓鍋。
1. 酶修復(fù),各自抗原特性選擇,有些時(shí)候酶修復(fù)的時(shí)間是極其難把握的。時(shí)間太長,消化過頭容易脫片;時(shí)間太短,抗原暴露不充分,這些都影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。建議稀釋濃度,延長修復(fù)時(shí)間。
2. 熱修復(fù),理論基礎(chǔ):抗原修復(fù)時(shí)僅需要組織與修復(fù)液接觸,且只要薄薄的一層就能反應(yīng)。
改良一:敞開高壓鍋蓋,置一鐵架于修復(fù)液面,其上放置玻片,玻片上滴加修復(fù)液體(鐵架高度以沸騰修復(fù)液不會(huì)觸及玻片為妥)。為了防止玻片上的修復(fù)液揮發(fā),可在滴加修復(fù)液后蓋上蓋玻片,提供熱源使修復(fù)液保持沸騰狀態(tài),使用熱蒸汽加熱。

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優(yōu)點(diǎn):避免了組織在液體中的劇烈沸騰,減少脫片。
缺點(diǎn):降低了抗原修復(fù)的溫度,可能導(dǎo)致某些抗原無法達(dá)到其修復(fù)所需溫度,使用此法可能需要適當(dāng)延長熱修復(fù)時(shí)間。
改良二:修復(fù)液煮沸后,滴加于載玻片上,覆蓋蓋玻片,用實(shí)驗(yàn)室常見的封口膜將玻片和蓋玻片包繞(包繞的目的不是為了隔絕空氣,而是防止蓋玻片移動(dòng)導(dǎo)致修復(fù)液在組織表面揮發(fā),封口膜受熱后收縮,即可固定)。將包繞好的玻片置入鐵架上,按原先操作繼續(xù)(可放入高壓鍋中)。

優(yōu)點(diǎn):避免了改良一中可能無法達(dá)到所需修復(fù)溫度的問題,可以放入高壓鍋中。
缺點(diǎn):片子變成平鋪展開,一次所能做的片子數(shù)目減少。

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需要注意的是,使用蓋玻片后,尤其是使用封口膜后,揭片的過程一定要輕柔,用鑷子,避免徒手操作,如遇到揭片困難,可適當(dāng)用 PBS 沖洗,不可暴力揭片,否則適得其反;另外由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)室條件不同,還應(yīng)根據(jù)自己所在實(shí)驗(yàn)室條件調(diào)整。

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